Определение группы крови и резус-фактора

• Группу крови по системе AB0 определяют реакцией агглютинации: стандартными сыворотками, перекрестным методом или цоликлонами.
• При плановом исследовании врач стационара определяет группу сыворотками или цоликлонами, затем кровь отправляют в лабораторию для проверки перекрестным методом.
• Реакцию проводят при 15–25 °C, наблюдают до 5 мин.
• Резус-фактор определяют экспресс-методами: в пробирке или на плоскости с антирезус-сывороткой.
• Цоликлоны: анти-А и анти-В; агглютинация с обоими — группа AB (IV), отсутствие — 0 (I).

Групповая принадлежность крови по системе АВ0 определяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время используют три способа определения групп крови по системе АВ0:

1. по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,
2. по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрёстный способ),
3. с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При плановом исследовании врач стационара определяет группу крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрёстным методом.

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам Этот способ в настоящее время наиболее распространен в клинической и лабораторной практике. Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15–25 °С.

Техника проведения реакции

1. На тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объёме 0,1 мл по три капли в следующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).
2. Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда.
3. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.
4. После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10–30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2 (II).
5. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрёстный способ) Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител α и β с помощью стандартных эритроцитов.

Необходимое оснащение

• Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отличается тем, что для реакции агглютинации необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), В (III).

Техника проведения реакции

• Кровь для исследования берут из вены в сухую пробирку, центрифугируют или оставляют в покое на 20–30 минут для разделения на сыворотку и эритроциты.
• На маркированную тарелку пипеткой в шесть ячеек наносят по одной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1 мл), а рядом с ними – по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп 0 (I), А (II), В (III) (по две серии).
• Дальнейшие мероприятия проводятся аналогично методу с использованием стандартных изогемагглютинирующих сывороток: соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего оценивают результат.

Определение групп крови моноклональными антителами

• Необходимое оснащение

Стандартные реагенты – моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определения агглютиногенов эритроцитов.

• Техника проведения реакции

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2–3 мин.

• Трактовка результатов

Оценка результатов очень проста:

• Наличие агглютинации с анти-А и отсутствие с анти-В – группа A (II).
• Отсутствие агглютинации с анти-А и наличие с анти-В – группа B (III).
• Наличие агглютинации с обоими цоликлонами – группа AB (IV).
• Отсутствие агглютинации с обоими цоликлонами – группа 0 (I).

Способы определения резус-фактора

Используются два так называемых экспресс-метода:

• Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.

Методика проведения реакции: На дно пробирки одну каплю стандартного универсального реагента (антирезусную сыворотку группы AB (IV)). Затем в неё добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген – антитело» и чёткой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2–3 мл физиологического раствора и перемешивают путём одно-двукратного перевёртывания пробирки (без взбалтывания!).

• Экспресс-метод определения Rh-фактора на плоскости без подогрева.

Методика проведения реакции: На белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка – антирезус», на правом – «контрольная сыворотка». Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ (IV), не содержащая антител анти-резус. Соответственно надписям на пластинке помещают по 1–2 капли (0,05–0,1 мл) реактива антирезус и контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом сухой стеклянной палочкой, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3–4 минуты для снятия возможной неспецифической агглютинации к каждой капле добавляют 5–6 капель физиологического раствора. Затем пластинку покачивают в течение 5 минут. Оценка результатов: Наличие хорошо выраженной агглютинации в капле слева указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации в этой капле (гомогенная окраска) говорит о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови (Rh–). Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле.

Лабораторные способы определения резус-фактора Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода:

• Метод агглютинации в солевой среде. Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус.
• Метод конглютинации с желатином. В пробирку помещают равные объёмы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10 % раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45–48 °С, после чего добавляют десятикратный объём физиологического раствора. Пробирки 2–3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.
• Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса). Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС). При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.
• Реакция с анти-В-моноклональными антителами.